第四次實驗報告

實驗日期：2015年12月28日(一)；2015年12月30日(三)
實驗地點：開南大學 卓越樓八樓 微生物實驗室
實驗報告紀錄者：葉珮伶、周汶靜

一、手部清洗與消毒之測試：塗抹法與ATP螢光法

此實驗為比較  A.  洗手前  B.  洗手後未消毒  C.  洗手後消毒  

三種情況下手上的微生物。而同時比對左手  (塗抹法)  與右手  (ATP法)  兩者之相關性。

•  未洗手之取樣：左手塗抹法，右手ATP法：原則上都是棉花棒沾無菌水潤濕後塗抹掌面、手指正面、指間縫隙、指尖與指甲，一邊取樣，一邊轉動棉花棒，使塗抹均勻。

• 洗手但未消毒之取樣：使用清潔劑洗手至少20秒，之後使用紙巾擦乾，進行取樣。

• 洗手且消毒之取樣：使用酒精，均勻噴雙手後搓勻，自然乾後進行取樣(至少要等30秒)。

• 塗抹法的取樣後的棉花棒，折斷手指碰觸過的部分，掉入的部分是沒有碰過的。使用試管震盪機混合後，取1mL移到下一管0.85NaCl (標為-1)，再進行一次稀釋 (標為-2)
• ATP冷光法需將測試棉花棒塞入試管，將試管內液體搖勻，底端白塊溶解，讓酵素產生作用後，插入冷光儀量測，由冷光儀計算數值。

• 經二重複將-1及-2的稀釋液中取1mL滴加在無菌空白的培養品等後倒入培養皿，混勻，冷凝後倒置培養在35°C，48小時後計算菌數。

塗抹法	ATP冷光法測驗

狀態	塗抹法 一重複/二重複	平均(CFU)	狀態	ATP冷光法數值
未洗手	10-1（1, 4）	0.25	未洗手	22,168
	10-2（1, 0）	0.005
洗手未消毒	10-1（28, 26）	0.27	洗手未消毒	1,507
	10-2（3, 2）	0.025
洗手後消毒	10-1（6, 4）	0.5	洗手後消毒	1,510
	10-2（3, 0）	0.015

備註：塗抹法為實驗者左手；ATP冷光法為實驗者右手

            同一時間同一人雙手進行測驗。塗抹法三次均同一人進行塗抹，ATP冷光儀也由另

            一人三次塗抹量測

	塗抹法	ATP冷光法
未洗手 (10-1)	一重複
	二重複

	塗抹法	ATP冷光法
未洗手 （10-2）	一重複
	二重複

	塗抹法	ATP冷光法
洗手未消毒 （10-1）	一重複
	二重複

	塗抹法	ATP冷光法
洗手未消毒 （10-2）	一重複
	二重複

	塗抹法	ATP冷光法
洗手後消毒 （10-1）	一重複
	二重複

	塗抹法	ATP冷光法
洗手後消毒 （10-2）	一重複
	二重複

二、水質檢測：過濾法測定生菌數 

每組有兩個 250mL 滅過菌的三角瓶 (一個取中餐教室的水樣，一個自行決定，本組取卓越樓八樓飲水機的水樣)，鋁箔封口以保持無菌狀態，直到取完水樣，封回鋁箔，帶回實驗室分析。

此過濾法是參考及簡化環保署法規─E205.57B  水中總菌落數檢測方法─濾膜法  之操作步驟

 到中餐教室取水 

• 依照環保署的方法，先用酒精或是火烤出水口進行消毒
• 使用滅過菌的瓶子，取水  200mL  以上
• 標示好取水的時間、地點等資訊，帶回生物實驗室分析。
• 另外樣品為卓越樓八樓飲水機冷水出口取樣

中餐教室

卓越樓八樓飲水機

使用過濾法測定生菌數 

組裝過濾器具及先練習放置過濾膜，取下過濾膜平舖在培養基上 

鑷子沾酒精後點燃以殺菌，打開無菌濾膜 (白色有格線，不是藍色紙片)，取出         後，格線朝上     平舖在過濾器，裝回漏斗，把刻度朝向自己。

倒入100mL樣品 (可以使用無菌離心管定量或是漏斗上的刻度 )，打開水龍頭，       進行流水抽氣過濾 (因為水管未固定，因此水龍頭不要全開，半開即可過濾)。

過濾完成，取下漏斗，鑷子先沾酒精燒過，小心取下濾膜，格線朝上，放               m-HPC培養皿中，在35°C，48小時培養箱培養後，再取出計算菌數。

切換過濾品時，可以使用火烤過濾漏斗以進行殺菌。

將無菌濾膜平鋪至過濾器上	倒入100mL樣品
取下濾膜，將其放在 m-HPC培養皿中	過濾法安全注意事項 待測三角錐品之瓶口經消毒滅菌後，分別至兩個不同地點進行採樣。 水質採樣品封口後，送至實驗室分別進行水質過濾分析。  酒精燈與放酒精燒杯需隔一段空            間放。 拿鑷子的手勢要注意不要讓酒精流下來燙到手。

中餐教室	卓越樓八樓飲水機

三、結論

手部清洗與消毒之測試實驗誤差:塗抹法與ATP冷光法

• 經二次不同實驗看出洗手未消毒之生菌數高於未洗手之生菌數，經老師與本組討論過 後，判斷水質可能為影響實驗數值誤差原因。〈因實驗前未測該水質之生菌數〉

• 經二次不同實驗過程中，因滴加稀釋液至培養品中未平均滴入，導致二次不同實驗皆產生培養基菌落差 ，而影響此次實驗數據。
• 本次實驗未取原液（10⁰）當對照組，而此次是由-1及-2的稀釋液為實驗組，導致每次測試一重複、二重複時有著實驗誤差，將於下次實驗調整重測。

水質檢測：過濾法測定生菌數

• 經二次不同實驗看出中餐教室之水生菌數明顯較高；卓越樓八樓飲水機冷水口有生菌，但明顯地較少生菌數。